روشهای اندازه گیری فعالیت آنزیم:

روشهای اندازه گیری فعالیت آنزیم:

براي تعيين فعاليت آنزيم كراتين كيناز روشهاي adp and gilarye،nutall، oliver،hughes‌ مطرح شده است.

روش Hughes:

متداولترين روش میباشد. در اين روش رنگ حاصل از تركيب كراتين آلفانتول و دي استيل كراتين كيناز را اندازه گيري ميكنند. اين واكنش با محلول پاراهيدروكسي بنزئات متوقف ميشود. در مقايسه با استاندارد در طول موج 540 nm -500اندازه گيري كرد. ميزان فعاليت طبيعي آنزيم در سرم بر حسب siqwa u/ml از 12-0 ميباشد كه مرز بيماري( (border line 20-12 و در موقع بيماري بالاتر از 20 ميباشد.

CPK

Creatine Phosphate + ADP ATP + Creatine

Creatine + diacetyl + alpha-naphtol Color Complex(pink)

روش فروکتوز 6 فسفات:

2ml از محلول CPK در یک لوله ریخته،50ml سرم به آن اضافه کرده و مخلوط کنید. سپس به مدت 3 دقیقه در بن ماری 370C قرار دهید . سپس جذب نوری آن را در طول موج 340nm به دست آورید و در فواصل یک دقیقه،3 بار دیگر جذب نوری به دست آورید.

∆ (OD) * 3410= CPK activity(Iu/L) Normal Range :24-195 (Iu/L)

CPK

Creatine phosphate + ADP Creatine + ATP

PH=6-7

Hexokinase

ATP + Glucose Glucose 6 phosphate + ADP

G6PD

6-phosphogluconolactone + NADPH Glucose 6 phosphate + NADP+

داروها و تداخل تست CPK :

مصرف داروها و مواد مخدر بخصوصي از جمله آمفوتريسينB،آمپي سيلين، برخي از بي حس كننده ها، ضد انعقادها، آسپرين، Clofibrate، دگزامتازون(دكارون)، فورزمايد(لازيكس)، مورفين، الكل، كوكائين، كاپتوپريل، كولشيسين، لواستاتين، ليتيوم، ليدوكائين، پروپرانول، سوكسينيل كولين ميتوانند در تداخل تست آزمايشگاهي و افزايش كاذب سطح CPK ‌موثر باشند. همچنين فعاليت سنگين و جراحيهاي اخير مكن است موجب افزايش سطح ايزوآنزيم ها شوند.

كراتينين

روزانه حدود دو درصد كل كرآتين توليد شده در بدن ، آب خود را از دست ميدهد و به كرآتينين تبديل میشود و به كمك جريان خون به كليه ها منتقل و توسط ادرار دفع ميشود. توليد ودفع كرآتينين با توده عضلاني رابطه مستقيم دارد و به همين دليل مردان و ورزشكاران مقادير بيشتري كرآتينين نسبت به زنان غير ورزشكار ، كودكان وسالمندان توليد ميكنند.كرآتينين در خون و در ادرار اندازه گيري ميشود.

هدف از اندازه گيري كرآتينين سرم

كرآتينين مانند نيتروژن اوره خون (BUN) كاملاً توسط كليه ها دفع ميشود و با عملكرد دفعي كليه رابطه مستقيم دارد. بنابراين با عملكرد دفعي طبيعي كليه سطح كرآتينين سرم ثابت و طبيعي خواهد ماند .اندازه گيري كرآتينين سرم براي تشخيص نارسايي هاي كليوي حتي بر اندازه گيري BUN هم ارجحيت دارد.واز آن جايي كه سطح كرآتينين نسبت به BUNديرتر افزايش مييابد پس افزايش آن روند مزمن بيماري را نشان ميدهد.عموماً افزايش دو برابر كرآتينين نشان دهنده پنجاه درصد كاهش GFRاست.

بهترين روش براي تعيين عملكرد گلومرولهاي كليوي تعيين زمان پاك سازي (كليرانس) كرآتينين از خون و ادرار است.

اصول ازمايش در اندازه گيري كرآتينين سرم:

براي اندازه گيري كرآتينين سرم از روش ژافه استفاده ميشود كه در آن كرآتينين در محيط قليايي با اسيد پيكريك واكنش داده و پيكرات كرآتينين قليايي قرمز رنگ توليد ميشود.واكنش اختصاصي نبوده و تركيباتي از قبيل اسيدهاي آمينه ، گلوكز، ويتامين C، پروتئین، اوره و بسياري تركيبات ديگر موجود در خون به اين آزمليش پاسخ مثبت ميدهند. افزايش اسيد سولفوريك به سرم در اين آزمايش جهت رسوب دادن پروتئینهاست.

مقادیر طبیعی کراتینین سرم:

مردان(بالغین):mg/dl1.1-0.5 يا micromol/L 97−44 (واحدSI)

زنان(بالغین): dl۬/mg 1.2-0.6 يا micromol/L 106-53(واحدSI)

جوانان: dl۬/ mg1-0.5 كودكان: dl۬/ mg0.7-0.3

اطفال زير يكسال : dl۬/ mg0.4-0.2 نوزادان: dl۬/ mg1.2-0.3

مقادير بيشتر از dl۬/ mg4 نشان دهنده آسيب شديد عملكرد كليه است. به دليل كاهش حجم عضله در افراد مسن و كودكان، سطح كرآتينين پايين تر است ٬ در چنين حالتي ممكن است بيماري كليوي اين بيماران آشكار نشود.

بيماريهاي مربوط به سطوح بالاي كرآتينين سرم:

گلومرولونفريت٬ پيلونفريت ٬ نكروزحاد توبولي ٬ انسداد مجاري ادراري ٬ كاهش جريان خون كليوي (مانند شوك ٬كم آبي ٬ نارسايي احتقاني قلب٬ آترواسكلروز ) ٬نفروپاتي ديابتي٬ نفريت٬ رابدوميوليز ٬ آگرومگالي و ژيگانتيسم

بيماريهاي مربوط به سطوح پايين كرآتينين سرم:

در كاهش توده عضلاني مانند دستروفي عضلاني ومياستني گراويس سطح كرآتينين سرم كاهش مييابد .

عوامل مداخله گر در آزمايش تعييين كرآتينين سرم:

رژيم غذايي غني از گوشت باعث افزايش موقتي سطح كرآتينين سرم ميشود. داروهاي آمينو گليكوزيدها (مانند جنتامايسين)٬ سايمتيدين٬ داروهاي شيمي درماني حاوي فلزات سنگين (مانند سيس پلاتين) وساير داروهاي سمي براي كليه مانند سفالوسپورين ها (ازجمله سفوكسي تين)٬ افزايش دهنده سطح كرآتينين است.

هدف از اندازه گيري كليرانس كرآتينين:

اين آزمايش مقياس GFR كليه است. كرآتينين توسط كليه ها دفع ميشود وبا GFR نسبت مستقيم دارد.( GFR تعداد ميلي ليتر فيلتره گلومرولي است كه در هر دقيقه توسط كليه دفع ميشود ). كليرانس كرآتينين مقياس GFR است.سطح سرمي و ادراري كرآتينين اندازه گيري ميشود وسرعت كليرانس محاسبه ميگردد.

مقادير طبيعي كليرانس كرآتينين (crcl):

مردان بالغ :ml/min 139- 107 يا cse /ml 2.32-1.78 (واحد SI)

زنان بالغ : ml/min 107- 87 يا cse /ml 1.78-1.45 (واحد SI)

نوزادان : ml/min 40-6.5

بعد از 20سالگي به علت كاهش GFR با گذشت هر دهه زندگي مقدار كليرانس كرآتينين به ميزان ml/min 6.5 كاهش مييابد.

نحوه محاسبه كليرانس كرآتينين (crcl):

براي انجام آزمايش crclبه جمع آوري ادرار 24 ساعته ويك سطح كرآتينين سرم نياز است.سپس crclاز طريق فرمول زير محاسبه ميشود:

U:كرآتينين دفع شده در ادرار 24 ساعته برحسب dl۬/ mg

V: حجم ادرار برحسب ml/min crcl=uv/p

P: كرآتينين سرم بر حسب ld/mg

مقادير كرآتينين معمولاً براي ارزيابي كامل بودن جمع آوري ادرار 24ساعته استفاده ميشود . در بيماراني كه كرآتينين طبيعي دارند crcl بايد نشان دهنده اين باشد كه آيا تمام ادرار در 24ساعت جمع آوري شده است يا نه .

موارد مربوط به افزايش كليرانس كرآتينين(crcl):

ورزش٬ بارداري٬ سندروم برون ده بالاي قلبي (با افزايش جريان خون كليه٬ GFR و crcl افزايش مييابد)

موارد مربوط به كاهش كليرانس كرآتينين(crcl):

آسيب عملكرد كليه (مانند آترواسكلروز٬ شريان كليوي ٬ گلومرولونفريت٬ نكروز توبولي حاد)

شرايطي كه منجر به كاهش GFR ميشود (مانند نارسايي احتقاني قلب ((CHF ٬سيروز همراه آسيت ٬شوك ٬دهيدراسيون) شرايطي كه با كاهش جريان خون كليه همراه است GFR را كاهش ميدهد.

عوامل مداخله گر در كليرانس كرآتينين(crcl):

ورزش موجب افزايش سطح كرآتينين ميشود.جمع آوري ناقص ادرار موجب نتايج كاذب پايين ميشود.حاملگي

crcl را افزايش ميدهد. رژيم غذايي غني از گوشت ميتواند موجب افزايش گذرا كرآتينين سرم و crcl شود.آمينوگليكوزيدها (مانندجنتامايسين)٬ سايمتيدين٬ داروهاي شيمي درماني حاوي فلزات سنگين (مانند سيس پلاتين) وداروهاي تفروتوكسيك مانند سفالوسپورين ها (مانند سفوكزيتين) داروهايي هستند كه ممكن است موجب سطوح بالاي اين آزمايش شوند.

سوالات تستی:

1-علاوه بر PTA ٬ انرژي لازم براي انقباض عضلاني توسط كدام يك از تركيبات زير تامين مي شود؟

الف)كرآتين فسفات √

ب)گوانيدين

ج)كالمادولين

د)تروپونين

2-جهت انجام واكنش هاي بيوشيميايي در عضله تمام تركيبات زير لازم اند بجز؟

الف)PDA

ب)PTA

ج)كرآتي نين√

د)كرآتين فسفات

3-تزریق عضلانی پنی سیلین سبب افزایش موقت سطح پلاسمایی کدام یک از آنزیم ها ی زیر می شود؟

الف)ACP

ب)ALP

√CPKج) ASTد)

4-میزان فعالیت ایزوآنزیم CPK-MB در کدام عضو بیشتر است؟

الف)قلب√

ب)کبد

ج)کلیه

د)ماهیچه

5- کدام ترکیب سبب پایداری CPK می شود؟

الف)یدو استات

ب)فلوراید

ج)سیستئین√

د)تارتارات

منابع:

بیوشیمی بالینی و آزمایشگاهی/دکتر علی گرانسر/انتشارات چهر/اول/1379

بیوشیمی بالینی هنری دیویدسون2007/ریچارد مک فرسون/سالار بختیاری-جواد محمد نژاد اروق/انتشارات اندشه رفیع/اول/1386

تکنیک ها و تشخیص های آزمایشگاهی/دکتر محمدرضا عابدی/انتشارات نور دانش

راهنمای سریع روش های تشخیص آزمایشگاهی PAGANA-PAGANA /امیر قادی پاشا-داوود لکستانی-سام زراعتیان/انتشارات برای فردا/1380

ضروریات بیوشیمی برای دانشجویان کاردانی علوم آزمایشگاهی/دکتر رضا محمدی/آییز/اول/87

بيوشيمي عمومي شهبازي-ملك نيا/دكتر پرويز شهبازي-دكتر ناصر ملك نيا/موسسه انتشارات وچاپ دانشگاه تهران/ج2/چاپ18/پاييز 1379

اصول نظري وعملي آزمايشگاه بيوشيمي / سيده زهرا بطحايي٬ نعمت الله رزمي٬ محمود خياطيان/انتشارات دبيزش/چاپ اول/زمستان1378

مرجع كامل تست هاي تشخيصي وآزمايشگاهي پاگانا/كتلين دسكا پاگانا٬ تيموتي جيمزپاگانا/دكتر رامين خدام٬ ناصر نژادي ٬سيدرضاموسوي/ انتشارات خسروي با همكاري نشر ديباج /چاپ اول/1386

مجموعه سوالات كنكور كارشناسي ارشد بيوشيمي/ گروه مولفين/انتشارات كتابخانه فرهنگ/چاپ اول/1386

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/003504.htm

http://webcache.googleusercontent.com/search?q=cache:LLVENqiesL0J:otomatik.ir/1389/04/137513.html+%22cpk%22&cd=10&hl=fa&ct=clnk&lr=lang_fa

http://webcache.googleusercontent.com/search?q=cache:0hinuT_5_t8J:forum.cinemacenter.ir/

روشهای اندازه گیری فعالیت آنزیم:

مطالب مشابه :

جزوه بیوشیمی برای کنکور در مقاطع کاردانی به کارشناسی- ارشد و دکتری

منابع کارشناسی ارشد سم شناسی

منابع آزمون دکتری بیوتکنولوژی پزشکی

پکیج کارشناسی ارشد ایمنولوژی پزشکی

پکیج کارشناسی ارشد بیوشیمی بالینی

پکیج کارشناسی ارشد بیوتکنولوژی پزشکی

پکیج کارشناسی ارشد نانوتکنولوژی پزشکی

روشهای اندازه گیری فعالیت آنزیم: