امتزاج پروتوپلاست و كاربرد آن در اصلاح نباتات

فهرست مطالب

عنوان صفحه

چکیده............................................................................................... 1

مقدمه............................................................................................... 2

تاریخچه........................................................................................... 3

فصل اول:................................................................................................... 10

بررسی امتزاج پروتوپلاسمی.................................................................... 11

1-1-امتزاج پروتوپلاست و تبادل سیتوپلاسم‌ها ............................................. 11

2-1-امتزاج پروتوپلاست و نوترکیبی ژنومهای پلاست........................................ 11

3-1-امتزاج پروتوپلاست و نوترکیبی ژنوم‌های میتوکندریایی............................... 12

4-1-کاربرد امتزاج رویشی در دستکاری گونه‌های زراعی.................................. 12

فصل دوم:بررسی روش‌های القاء امتزاج......................................... 17

1-2- امتزاج خود به خودی..................................................................... 18

2-2-روش القا امتزاج با پلی‌اتیلن گلیکول (PEG) .......................................18

3-2-استفاده از نیتریت سدیم................................................................... 19

4-2-استفاده از کلسیم و PH بالا.............................................................. 19

5-2-روش‌های مصون‌سازی....................................................................... 19

6-2-امتزاج مکانیکی............................................................................... 20

7-2-امتزاج الکتریکی............................................................................... 20

8-2روش‌های دیگر:................................................................................. 20

1-8-2 کلکسیون مشاهده‌ای.................................................................... 21

2-8-2نشان‌های فلورسانی.................................................................... 21

3-8-2-استفاده از دستگاه سورت كنندسلولي فعال شده با فلورسانس............. 22

4-8-2سلکیسون با توجه به مواد غذایی....................................................... 22

5-8-2حساسیت به نور............................................................................ 22

6-8-2حساسیت به دارو و مقاومت ............................................................ 22

جداسازی و امتزاج پروتوپلاست...................................................... 23

9-2روش مکانیکی.............................................................................. 24

10-2روش آنزیمی................................................................................... 24

11-2وضعیت فیزیولوژی بافت‌ها و سلول ها............................................... 25

12-2تعدیل کننده فشار اسمزی................................................................ 27

13-2خالص سازی پروتوپلاست............................................................... 28

14-2قابلیت حیات و تراکم پروتوپلاست.................................................... 29

15-2تکنیک های کشت......................................................................... 30

16-2کشت مایع.................................................................................... 31

17-2محیط کشت.................................................................................. 32

18-2عوامل محیطی................................................................................ 33

نمو پروتوپلاست.............................................................................. 34

19-2تشکیل دیواره سلولی...................................................................... 34

20-2رشد و تقسیم و بازاریابی.................................................................. 34

21-2هیبدریداسیون سوماتیکی............................................................... 35

مکانیزم امتزاج................................................................................. 36

22-2اتصال یا چسبیدن.......................................................................... 36

23-2امتزاج غشاهای پلاسمایی در مکان مشخص....................................... 36

فصل سوم: دستورالعمل جداسازی و امتزاج پروتوپلاست............... 38

1-3شناسایی و گزینش سلول های هیبرید.................................................. 39

2-3تأئید و بیان خصوصیات هیبریدهای سوماتیکی................................... 43

3-3مقدار کروموزوم در هیبریدهای سوماتیکی........................................... 46

4-3جدول: صفات ژنتیکی انتقال یافته از طریق امتزاج پروتوپلاست...................... 49

5-3پتانسیل هیبریداسیون سوماتیکی...................................................... 50

6-3مشکلات و محدودیت‌های هیبریداسیون سوماتیکی.................................. 53

فصل چهارم..................................................................................... 59

بررسی امتزاج پروتوپلاسمی در برخی گیاهان................................ 60

1-4-سیب زمینی.................................................................................. 60

2-4-چغندر قند.................................................................................. 66

نتیجه‌گیری و منابع.............................................................................. 74

چکیده

دورگ‌گیری سوماتیکی (somatic hybridization) و امتزاج پروتوپلاست (Protoplast Fusion) در جنس‌ها و گونه‌هایی انجام می‌شود که تلاقی‌پذیری ندارند. اینکار به منظور دست‌کاری گونه‌های گیاهی و در جهت افزایش تنوع ژنتیکی و ایجاد صفات و یا گیاهان جدید و تولید سیبریدها استفاده می‌شود. این فنون با رفع محدودیت تلاقی‌های بین‌گونه‌ای و بین‌جنسی از طریق کشت تخمک نارس یا بالغ (Invitro pollination) و با به کارگیری فنون نجات (یاکشت) جنین (embrio rescue) به عنوان مکمل روش‌های اصلاح سنتی عمل نمایند. دورگ‌گیری سلولهای سوماتیکی یک فرآیند چند مرحله‌ای است که شامل جداسازی پروتوپلاستهای گونه‌های متفاوت، آمیختن پروتوپلاستهای حاصل از دوگونه متفاوت، و کلون کردن پروتوپلاستهای هیبرید مخلوط شده و تجدید نسل گیاهان هیبرید بارور حاصل از پروتوپلاستهای آمیخته است. از جمله صفاتی که در این روش برای انتقال مورد توجه هستند می‌توان تحمل به تنش‌های محیطی از قبیل سرما، شوری، خشکی، و مقاومت به آفات و بیماریها را نام برد. ایجاد دورگ‌گیری سوماتیکی به روش امتزاج پروتوپلاست در بیش از 30 گونه و 12 جنس انجام شده است. پومیتو (Pomato) تنها گیاه جدیدی است که در طریق امتزاج پروتوپلاست گوجه‌فرنگی و سیب‌زمینی تولید شده است ولی هنوز بهره‌برداری کشاورزی ندارد.

واژه‌های کلیدی: دورگ‌گیری سوماتیکی، امتزاج پروتوپلاست، سیبرید، نجات جنین، پومیتو

مقدمه:

پروتوپلاست سلولی است که دیواره آن بطور کامل حذف شده است. امتزاج پروتوپلاست عبارت است از اخطاط پروتوپلاستهای گیاهی (سلولهای عاری از دیواره سلولی) از سلولهای سماتیکی گونه‌های متفاوت و تجدید نسل گیاهان هیبرید حاصل از پروتوپلاست‌های مخلوط شده می باشد. اولین تلاش موفقیت‌آمیز در امتزاج پروتوپلاست گل اطلسی توسط پاور و همکارانش (Power et al, 1976) در انگلیس و نیز کارلسون و همکارانش (Carlson etal, 1975) در آمریکا در تنباکو بود. بعد از جداسازی پروتوپلاست تنها مانع بین سیتوپلاسم و محیط خارجی غشا پلاسما می باشد. فقدان دیواره سلولی باعث برقرار شدن تماس نزدیک غشا پلاسمایی دو یا چند پروتوپلاست می‌شود که این امکان تحت شرایط طبیعی وجود ندارد وقتی غشا پلاسمایی دو پروتوپلاست با هم تماس می‌یابند، تحت بعضی شرایط آنها همانند دو حباب صابون به همدیگر خواهند چسبید. بعداً اگر محرک مناسبی بر روی آنها اعمنال شود بار دیگر مثل دو حباب صابون با یک دیگر امتزاج یافته و به صورت یک گوی احاطه شده با یک غشا در می‌آیند. امروزه توجه زیادی برای امتزاج پروتوپلاست به عنوان یک وسیله بهنژادی گیاهان صورت می‌گیرد. اگرچه نتایج مثبت در این زمینه جهت تولید گیاهان زراعی اصلاح شده خیلی نادر است ولی اشخاص زیادی امتزاج پروتوپلاست را یک وسیله مقید برای اصلاح‌گران می‌دانند که آنها می‌توانند با استفاده از این روش گونه های ناسازگار جنسی را با هم تلاقی داده و صفات هسته‌ای و سیتوپلاسمی در منتقل نمایند. امتزاج پروتوپلاست را می‌توان برای تلاقی درون گونه ای، درون جنسی و بین جنسی به کار برد. امتزاج پروتوپلاست ابزاری در جهت نیل به توارث فراجنسی ژنوم‌های اندامکی هر دو والد به شمار می‌رود. در فراوردههای الحاقی که هسته‌ها، پلاستها و میتوکندری‌های هر دو والد در یک سلول حضور دارند، اجتماع تازه‌ای از هسته یک گونه و اندامکهای یک گونه دور پدید می‌آید. از طرفی نیز اثرات متقابل در سطح DNA بین ژنومهای اندامکی موجبات خلق ژنوم‌های جدید مورد علاقه در اصلاح نباتات می شود. امتزاج پروتوپلاست و دورگ‌گیری سوماتیکی در جنس‌ها و گونه‌هایی انجام می‌شود که تلاقی‌پذیری ندارند. اینکار به منظور دست‌کاری گونه‌های گیاهی و در جهت افزایش تنوع ژنتیکی و ایجاد صفات و یا گیاهان جدید و تولید سیبریدها (دورگ‌های سیتوپلاسمی) استفاده می‌شود. با توجه به اینکه امتزاج پروتوپلاست برای آمیزش گونه هایی که نمی‌توان به صورت جنسی تلاقی یابنداستفاده می‌شود، لذا امتزاج پروتوپلاست را دورگ‌گیری شبه جنسی (Parasexual Hybridization) نیز نام‌گذاری کرده‌اند. این فنون با رفع محدودیت تلاقی‌های بین‌گونه‌ای و بین جنسی از طریق کشت تخمک نارس یا بالغ (Invitro pollination) و با به کارگیری فنون نجات (یاکشت) جنین (embrio rescue) به عنوان مکمل روش‌های اصلاح سنتی عمل نمایند. پومیتو (Pomato) تنها گیاه جدیدی است که از طریق امتزاج پروتوپلاست گوجه‌فرنگی و سیب زمینی تولید شده است ولی هنوز بهره‌برداری کشاورزی ندارد.

تاریخچه

در طی سه دهه گذشته، تعداد دانشمندان علوم گیاهی که از تکنیک‌های کشت سلول، بافت و اندام در اصلاح نباتات استفاده می‌نمایند، افزایش چشمگیری داشته است. اصطلاح کشت بافت گیاهی به طور عمومی به کشت گیاهان، بذور و اجزای گیاهی (بافت‌ها، اندام‌ها، جنین‌ها، تک سلول‌ها، پروتوپلاست‌ها، و غیره...) به صورت این‌ویترو در محیط‌های غذایی خاص و تحت شرایط استریل اتلاق می‌شود.

در سال‌های 1800، تئوری سلولی، که بیان می‌ماید سلول واحد ساختمانی تمام موجودات زنده است، خیلی سریع مورد قبول قرار گرفت. معذالک قسمت دوم این تئوری که این واحد ساختمانی را مستقل دانسته و خاصیت توتی پوتنسی (باززایی فراگیر) (Totipotency) را برای آن تعریف می‌نماید، مورد قبول عموم واقع نشد. عدم پذیرش قسمت دوم به دلیل عدم توانایی دانشمندانی چون شلیدن و شوان (Schleiden and Schwan) برای اثبات پدیده باززایی فراگیر در شرایط این‌ویترو بود. در سال 1902 فیزیولوژیست مشهور آلمانی گوتلیب‌ هابرلند (Gottlieb haberlandt) تلاش‌هایی در زمینه کشت سلول‌های بافت‌های گیاهی در این‌ویترو انجام داد. وی که بعنوان پدر علم کشت بافت گیاهی ملقب است، شرایط مطلوب کشت سلول‌های رویشی جدا شده از گیاهان عالی را به وضوح بیان نمود. وی بیان کرد که: تا جایی که اطلاع دارم هیچ تلاش سازمان یافته و منظمی برای کشت سلولهای رویشی ایزوله شده گیاهان عالی در محلول غذایی صورت نگرفته است و نتایج چنین آزمایشاتی دیدگاههای جالبی در رابطه با خصوصیات و پتانسیل‌هایی که یک سلول به عنوان یک موجود اولیه دارا می‌باشد، ارائه خواهد داد. علاوه براین، این آزمایشات اطلاعاتی درباره اثرات متقابل درونی و تکمیل کنندگی سلول‌ها در درون موجود پرسولی فراهم خواهد کرد.

هابرلند آزمایشاتش را در سال 1989 با استفاده از سلول‌های ایزوله شده از بافت نرده‌ای برگها، پارانشیم مغزی، اپیدرم و کرکهای اپیدرمی گیاهان مختلف آغاز نمود. وی این مواد گیاهی را در محلول نمکی ناپ (Knop) محتوی ساکارز کشت داد و رشد آشکاری را در سلول‌های نرده ای مشاهده کرد. معذالک، متأسفانه هیچیک از سلول‌ها تقسیم نشدند، اما این مسئله مانع از انجام چنین آزمایشاتی توسط دیگران نشد. در اوایل سال های 1920 محققان مجدداً برای کشت بافت‌ها و اندام‌های گیاهی در این‌ویترو تلاش کردند. مولیارد (Molliard) در سال 1921 به موفقیت‌های محدودی در کشت جنین‌های گیاهی دست یافت و بدنبال آن کوته (Kotte, 1922) دانشجوی هابرلند در آلمان و بطور مستقل روبینز (Robbins, 1922) موفق به تثبیت نوک ریشه‌های گیاهی جدا شده، در این‌ویترو شدند.

معذالک، در سال 1934 کار مقدماتی کشت ریشعه‌های جدا شده گوجه فرنگی در این‌ویترو برای مدت زمان کوتاهی بدون محدودیت‌های نظری توسط وایت (White, 1943) انجام شد. در ابتدا وایت از محیط حاوی نمک‌های غیرآلی، عصاره مخمر و ساکارز استفاده کرد، اما بعدا عصاره مخمر توسط سه ویتامین B به نامهای پیریدوکسین، تیامین و نیکوتینیک اسید جایگین شد. در همان سال، گاترت (Gautheret) مشغول آزمایشی ا نوک ریشه‌های جدا شده و کشت بافت کامبیوم حاصل از Salix capraea ، Populus nigra و درختان دیگر در شرایط استریل در محیط کشت ناپ حاوی گلوکوز و هیدروکلرید سیستئین بود و گزارش کرد که این بافت‌ها به مدت چندماه تکثیر شدند. این مطالعات تداوم یافت و در سال 1939 گاترت، نویه کورت و وایت، مستقلاً مطالعتشان را در مورد کشت موفقیت‌آمیز و طولانی مدت بافت‌های کامبیوم ریشه هویج (Gautheret, 1939)، توتون (White, 1939)، و هویج (Nobecourt,1939) منتسر نمودند. این سه گزارش اولین کشت‌های بافت گیاهی واقعی در طویل المدت از بافت‌های سازمان نیافته می‌باشند. روش‌ها و موادی که اکنون استفاده می‌شوند، در اصل تغییراتی از همان مواد و روش‌هایی است که توسط این سه پیشگام ارائه شد. هرسه محقق از سلول‌های مریستمی برای تولید کشت‌های در حال رشد مداوم، استفاده کردند. فیلیپ وایت (1943، 1954 و 1963) و روگر گاترت (1959) با چاپ نتایج آزمایشات خود و فراهم کردن حرکتی در این زمینه شایسته تقدیر فراوان می‌باشند.

از سال 1939 تا 1950 کار آزمایش با کشت های ریشه‌ای، توجه محققان را به نقش ویتامین‌ها در رشد گیاه و افزایش دانش ارتباط ساقه با ریشه جلب کرد. در اوایل دهه 1950 چند خط تحقیقاتی ایجاد گردید. کار میلر (Miller) و اسگوک (Skoog) (1953) در تشکیل جوانه از ریزنمونه‌های کشت ساقه گیاه توتون منجر به کشف کینتین شد. استوارد در سال 1952 کار برروی ریزنمونه‌های کشت شده هویج را شروع و از شیره نارگیل به عنوان محیط غذایی استفاده کرد (Steward et al., 1952)، که در نهایت منجر به کشف جنین‌زایی شد. در سال 1953 مویر (Muier) گزارش کرد که اگر قطعاتی از بافت کالوس گیاهان Tagetes erecta و Nicotiana tabacum به محیط غذایی مایع منتقل شوند و محیط غذایی هرازگاهی تکان داده شود، قطعات کالوس می‌شکنند و سوسپانسیونی از سلول‌های انفرادی و توده‌های سلولی تولید می‌کنند. وی بعداض تکنیک کشت خزانه را ابداع کرد. در سال 1960 تکنیک مهم کشت تعداد زیادی از سلول‌های منفرد گیاهان عالی توسط برگمن ابداع شد (Bergman, 1960).

تولید گیاهان کامل در کشت بافت ممکن است از طریق تمایز ساقه و ریشه و یا از طریق ورود سلول‌ها به نمو جنینی و تولید جنین‌های سوماتیکی رخ دهد. تمایز گیاهان کامل از کشت‌های کالوس غالباً به عنوان روشی بالقوه برای تکثیر سریع پیشنهاد شده است. بال (Ball) در سال 1946 با کشت نوک ساقه به همراه دو برگ آغازین موفق به تولید گیاهان کامل قابل نشاء در Lupinus و Tropaeolum شد.

افتخار استفاده عملی از این تکنیک نصیب مورل (Morel) و مارتین (Martin) در سال (1952) شد، که برای اولین بار گیاهان کوکب عاری از ویروس تولید کردند. مورل (1960) همچنین پتانسیل این روش را درتکثیر سریع ارکیده‌های عاری از ویروس تشخیص داد. آزادسازی پروتوپلاست‌ها از سلول‌های نوک ریشه با استفاده از سلولاز قارچی در M 6/0 ساکارز توسط کوکینگ (Coking) در سال 1960 گزارش شد. پروتوپلاست‌های آزاد شده توسط آنزیم‌های تخریب کننده دیواره سلولی اکنون در بسیاری از بافت‌های گیاهی تهیه شده است. محیط کشت غنی از نمک موراشیگ و اسکوگ (Murashige and Skoog) که پرکاربردترین محیط کشت بافت گیاهی می‌باشد، در سال 1962 توسط اسکوگ و دانشجویانش تولید شد. علاوه بر نمک‌های معدنی، محیط کشت‌ها حاوی یک منبع انرژی، ویتامین‌ها و تنظیم کننده‌های رشد نیز می‌باشند.

در دهه 1970، آنزیم‌های محدود کننده (برشی) کشف شد. تکنیک‌هایی توسط لوبان (Lobban) و کیسر (Kaiser) برای اتصال دو قطعه DNA توسط آنزیم لیگاز ابداع شد. دهه 1980 شاهد توسعه تکنیک‌های متعدد ترانسفو.رماسیون ژنتیکی بود که انقلابی در تکنولوژی DNAی نوترکیب ایجاد نمود و منجر به تولید گیاهان تراریخت در محصولات زراعی متعدد گردید. اهم تحقیقات و بعضی از کسانی که در این زمینه نقش داشته‌اند در ادامه ذکر گردیده است و یافته‌های جدید در فصل‌های مختلف کتاب بحث خواهند شد.

1902- اولین تلاش در زمینه کشت بافت گیاهی (Haberlandt).

1904- تلاش در زمینه کشت جنین تعدادی از گیاهان انتخاب شده از تیره شب بو (Hanning).

1922- جوانه زنی مستقل بذرهای ارکیده در این‌ویترو (Knudson)

1922- کشت این‌ویترو نوک ریشه (Rubbins).

1925- استفاده از تکنیک کشت جنین در تلاقی‌های بین گونه‌ای در جنس (Laibach) Linum

1934- کشت این‌ویترو بافت‌های کامبیومی تعدادی از درختان و بوته‌ها، اگرچه موفق به تداوم تقسیم سلولی نشدند (Gautheret).

1934- کشت موفق ریشه‌های گوجه‌فرنگی (White).

1939- تولید کشت‌هایی از بافت کالوس با قابلیت رشد مداوم (Gautheret, Nobecourt, White).

1940- کشت این‌ویترو بافت کامبیومی نارون جنس Ulmus به منظور مطالعه نحوه شکل‌گیری ساقه‌های نابجا (Gautheret).

1941- استفاده از شیره نارگیل حاوی یک فاکتور تقسیم سلولی برای اولین بار در داتوره (van overbeek).

1941- کشت این‌ویترو بافت‌های گال طوقه (Braun).

1944- تولید ساقه‌های نابجا در گیاه توتون در شرایط این‌ویترو (Skoog)

1946- تولید گیاهان کامل جنس Lupinus و Tropaeolum با استفاده از کشت نوک ساقه آنها (Ball)

1950- باززایی اندام‌ها از بافت کالوس در گیاه (Ball) Sequioa sempervirens.

1952- استفاده از کشت مریستم برای بدست آورده گل کوچک عاری از ویروس (Morel and Martin).

1952- اولین کاربرد ریزپیوندی (Morel and Martin).

1953- تولید بافت کالوس هاپلوئید با کشت دانه گرده از گیاه بازدانه (Tulecke) Ginkgo biloba.

1954- باززایی اولین گیاه حاصل از کشت یک سلول منفرد (Muir et al.).

1955- کشف هورمون کینتین که جزو هورمون‌های دخیل در فرایند تقسم سلولی می‌باشد (Miller et al.)

1957- کشف چگونگی تنظیک فرایند اندام‌زایی با تغییر نسبت اکسین- سیتوکینین (Skoog and Miller).

1958- باززایی جنین‌های رویشی از هسته تخمک‌های مرکبات در این‌ویترو (Maheshvari and Rangaswam).

1959- انتشار اولین کتاب در زمینه کشت بافت گیاهی (Reinert, Steward).

1959- باززایی جنین از بافت کالوس و سوسپانسیون سلولی در (Gautheret) Daucus carota.

1960- اولین گرده افشانی مصنوعی در لوله آزمایش در گیاه (Kanta) Papaver rhoeas.

1960- استفاده از تکنیک ریزکشتی (Microculture) برای پرورش سلول‌های منفرد در قطره‌های آویزان (Hanging drop) و تحت شرایط کنترل شده (Jones et al.).

1960- تجزیه آنزیمی دیواره سلولی برای تهیه تعداد زیادی پروتوپلاست (Cocking).

1960- جداسازی سلول‌های منفرد از سوسپانسیون سلولی با استفاده از فیلتر (Bergmann).

1962- تولید محیط کشت موراشیگ و اسکوگ (Murashge and Skoog).

1964- تولید اولین گیاهان هاپلوئید از دانه‌های گرده گیاه داتوره (Guha and Maheshwari).

1970- گزینش موتانت‌های بیوشیمیایی در این‌ویترو با استفاده از تنوع ایجاد شده در کشت بافت (Carlson).

1970- اولین موفقیت در امتزاج پروتوپلاست‌ها (Power et al.)..

1970- کشف اولین آنزیم اندونوکلئاز برش دهنده از Haemophilus influenzae که این آنزیم‌ بعداً خالص‌سازی و با نام Hind II معرفی شد (Smith).

1971- تهیه اولین نقشه برشی با استفاده از آنزیم Hind II و برش مولکول DNAی حلقوی SV40 به یازده قطعه مشخص (Nathans).

1971- باززایی اولین گیاهان از کشت پروتوپلاست (Takabe et al.)

1972- اولین گزارش از هیبریداسیون بین گونه‌ای با استفاده از امتزاج پروتوپلاست‌ها در دو گونه از جنس (Carlson et al.) Nicotiana.

1972- اتصال دو قطعه DNAی برش یافته به هم با استفاده از آنزیمی که عملی مشابه DNA لیگاز دارد (Mertz and Davis).

1972- ابداع روشی که در آن برای پرکردن هرفاصله تک رشته از آنزیم مناسب می‌توان استفاده کرد و استفاده از DNA لیگاز برای اتصال دو قطعه به هم بطوریکه مولکول DNAی نوترکیب تشکیل شود. (Lobban and Kaiser).

1973- استفاده از تکنیک لوبان و کیسر برای ایجاد پلاسمید هیبرید- جاسازی یک قطعه EcoRI از مولکول DNA به درون DNAی حلقوی پلاسمیدهای باکتریایی با استفاده از DNA لیگاز (Boyer and Cohen).

1973- کشف نقش سیتوکینین در شکستن دوره خواب ریزنمونه‌های جدا شده از انتهای ساقه گیاه (Pierik et al.) Gerbera.

1974- باززایی گیاه‌ هاپلوئید Petunia hybrida از کشت پروتوپلاست (Binding).

1974- بیوترانسفورماسیون (Biotransformation). در کشت بافت‌های گیاهی (Reinhard).

1974- کشف خاصیت تومورزایی پلاسمید Ti باکتری Agrobacterium tumefaciens در گیاهان (Zaenen et al.; Larebeke).

1975- گزینش مثبت کشت‌های کالوس ذرت مقاوم به تی- توکسین ناشی از قارچ Helminthosporium maydis در این‌ویترو (Gengenbach and Green).

1976- تولید ساقه از کشت نوک ساقه‌های نگهداری شده در شرایط انجماد در گیاه میخک صدپر (Seibert).

1976- کشف این نکته که سنتز و تجزیه اکتوپین و نوپالین با منشاء ژنتیکی توسط پلاسمید Ti باکتری Agrobacterium tumefaciens کنترل می‌شود. (Bomhoff et al.).

1977- تلفیق DNAی پلاسمید Ti باکتری Agrobacterium tumefaciens در ژنوم گیاهان (Chilton et al.).

1977- ابداع روش خاتمه زنجیره با استفاده از دی‌داکسی نوکلئوتیدها برای تعیین توالی ژن‌ها (Sanger and Koulson).

1977- ابداع روشی مبتنی بر تجزیه شیمیایی زنجیره DNA برای تعیین توالی ژن‌ها (Maxam and Gilbert).

1977- کشف ژن‌های متفرق (Sharp and Roberts).

1978- هیبریداسیون سوماتیکی گوجه‌فرنگی و سیب‌زمینی که منجر به تولید گیاه پومیتو (Pomato) شد (Melchers et al.)

1979- روش کشت همجواری برای تراریختی پروتوپلاست‌های گیاهی توسط Agrobacterium tumefaciens ابداع گردید. (Marton et al.).

1980- استفاده از سلول‌های کامل غیرمتحرک به منظور بیوترانسفورماسیون دیجیتوکسین به دیگوکسین (Alfermann et al.)

1980- با کلون کردن قطعات حاصل از هضم کامل پلاسمید T37 باکتری مولد گال طوقه توتون توسط آنزیم EcoRI در یک فاژ ناقل، امکان مطالعه تفصیلی توالی‌های مرزی T-DNA فراهم شد و نطالعاتی در زمینه ساختار T-DNA صورت گرفت (Zambryski et al.)

1981- معرفی واژه تنوع سوماکلونال (Larkin and Scowcroft).

1982- با تلفیق DNAی بدون پوشش در پروتوپلاست‌های گیاهی، روش استفاده از DNAی خالص برای تراریختی سلول‌های گیاهی ابداع شد. (Krens et al.)

1984- تراریختی توتون با میانجیگری آگروباکتریوم و رشد موفق گیاهان تراریخت (De Block et al.) (Horsch et al.)

1986- تولید گیاهان تراریخت توتون مقاوم به ویروس موازائیک توتون و گوجه‌فرنگی‌های تراریخت با استفاده از cDNAی ژن پروتئین پوشش ویروس (Powell-Abel et al.)

1987- ابداع روش انتقال ژن بیولیستیک (Biolistic) برای تراریختی گیاهان (Sanford et al.; Klein et al.)

امتزاج پروتوپلاست و كاربرد آن در اصلاح نباتات

مطالب مشابه :

دانلود پاورپوینت با موضوع کشت بافت

دانلود جزوه مبانی کشت بافت - دکتر مهدی شاهسوند

تاریخچه کشت سلول

امتزاج پروتوپلاست و كاربرد آن در اصلاح نباتات

سیاهک آشکار Ustilaga tritici

محاسبه بار میکروبی شیر ((Total Count

بهبود سريع گياهان زراعي با استفاده از روش کشت بافت

انواع کشت