تاثیر اسانس های کنه کش و حشره کش در Varroa destructor (Acari: Varroidae) و Apis mellifera (Hymenopt

هدف از انجام این کار، به ارزیابی زیست فعالی از برخی از اسانس ها در Varroa destructor و Apis mellifera در رابطه با ترکیب شیمیایی و خواص فیزیکی آنها است.

آزمایش :

گونه های گیاهی و انزوا اسانس

بخش های هوایی از برگ بو (Laurus nobilis L. (Lauraceae))، آویشن (تیموس ولگاریس L. )Labiatae))، اسطوخدوس (اسطوخودوس officinalis Chaix سابق Villars (Labiatae)) و lavendin (hybrida کشیش (اسطوخودوس اسطوخودوس officinalis Chaix X اسطوخودوس latifolia. Medik. Labiatae)) از منطقه های مختلف جغرافیایی از آرژانتین جمع آوری شد: مرسدس ویلا (33 º 40 'S. 65 º 27' W)، سان لوئیس استان، سیرا د لا نمایید (38 º 08 'S. 61 º 47' W) و Colinas Verdes (37 º 54 'S، 57 º W 49 ')، بوئنوس آیرس استان، بود. نمونه ها شناسایی و در دانشکده علوم دقیق و طبیعی، دانشگاه ملی گیاهان خشک گیاهدان ماردل پلاتا، آرژانتین سپرده شد. اسانس به طور جداگانه از برگ هایhydrodistillation با استفاده از Clevenger فارماکوپه اروپا نوع دستگاه (ریچارد و همکاران 1992) به مدت 2 ساعت جدا شده بودند، به طور متوسط 100 گرم از برگ در هر زمان مورد استفاده قرار گرفت،distillations چند تا به دست آوردن حجم مناسب برای تمام آزمایشات ساخته شد. اسانس بیش از سولفات سدیم بی آب خشک شده و ذخیره شده در پیچ دربسته ویال شیشه ای تیره در 5-8 ° C تا تجزیه و تحلیل بیشتر است.

تجزیه و تحلیل اسانس

روغن با گاز کروماتوگرافی (GC) با استفاده از SHIMADZU کروماتوگراف GC-17A مجهز به یک آشکارساز یونیزاسیون شعله (FID) مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. جداسازی با استفاده از یک DB-1 ستون سیلیس ذوب شده (60 متر × 0.248 میلیمتر، ضخامت 0.25 میکرومتر) انجام شد. درجه حرارت فر از 60-240 ° C در 3 برنامه ریزی ° C / دقیقه، و دمای نهایی به مدت 10 دقیقه برگزار شد. انژکتور و درجه حرارت آشکارساز در دمای 230 ° C و 250 ° C، به ترتیب، گاز حامل نیتروژن در جریان 0.9 میلی لیتر / دقیقه تنظیم شد. GC / اسپکترومتر جرمی (MS) تجزیه و تحلیل بر روی Perkin-المر، QMass 910 GC عامل در 70 ولت مجهز به سیلیکا ستون DB-5 ذوب شده (30 متر × 0.25 میلی متر، ضخامت 1.0 میکرومتر) انجام شد. انژکتور و درجه حرارت آشکارساز 250 ° C، درجه حرارت اجاق گاز برنامه ریزی شده از 60 ° C (5 دقیقه)، 60-220 ° C در 3 °C / دقیقه و 220 ° C (8)؛ گاز حامل هلیوم در جریان، از مجموع 1 میلی لیتر / دقیقه است. شناسایی قطعات در مقایسه طیف جرم خود را با کسانی که در ادبیات (آدامز، 2001) و با کامپیوتر جستجو از 70 طیف توده EV خود با کسانی که در کتابخانه GC / MS سیستم اطلاعات ذخیره شده در گزارش، و همچنین حفظ شد شاخص. داده های کمی با ادغام الکترونیکی درصد FID منطقه بدون استفاده از عوامل مجموعه به دست آمده است. تجزیه و تحلیل با استفاده از سه نسخه ساخته شده بودند.

تعیین خواص فیزیکوشیمیائی

بازده اسانس بر اساس به Retamar (1982) محاسبه شده است. برای تراکم به 20 ° C، سه نسخه، از مجموع 1 میلی لیتر از اسانس و وزن و ارزش به طور متوسط (Montes 1981) محاسبه شد. شاخص انکسار با توجه بهAOAC 921.08 مقام روش (AOAC 1999) در 20 تعیین شد ± 0.05 ° C، با انکسارسنج کشیش بازتابش کلی. روغن در غلظت 12.5 پی پی ام در اتانول برای نمونه آویشن (Montes 1961)، و 200 پی پی ام برای روغن های ضروری دیگر به ماوراء بنفش قابل رویت (UV-VIS) طیف سنجی قرار گرفتند، با استفاده از اسکنSHIMADZU UV-2101PC اسپکتروفوتومتر. غلظت های مختلف با توجه به معادله لامبرت-آبجو انتخاب شدند. طیف سنجی مادون قرمز (IR)، از نمونه مایع به عنوان یک فیلم نازک در نمک طعام ویندوز با FTIRمتسون، اسپکتروفتومتر مدل پیدایش II ثبت شد. این طیف از هشت اسکن اندازه گیری با وضوح از 2 CM-1 در طیف وسیعی از 500-4،500 CM-1 انباشته شد.

مواد بیولوژیکی

کلنی Apismellifera با V.destructor بسیار آلوده مورد استفاده قرار گرفت. ، استان بوئنوس آیرس، آرژانتین کندوها در زنبورستان تجربی از دانشگاه ملی ماردل پلاتا، در نزدیکی ماردل پلاتا (W 38 درجه 10'06 "57 º 38'10 S") قرار گرفتند. همه مستعمرات گذاشته شده درمان نشده در برابر Varroa برای 12-24 ماه گذشته بود. بالغ کنه زن بودند از نوزادان سالم پوش با باز کردن و بازرسی از سلول های فرد جمع آوری شده است. به منظور جلوگیری از گرسنگی، انگلها لارو زنبور و یا شفیره در ظروف پتری در فرایند جمع آوری نگهداری می شود. کنه که به تازگی moulted، ضعیف و غیر طبیعی به نظر می رسید، دور انداخته شد چرا که آنها می تواند پاسخ های مختلف را داشته باشند. زنبوران کارگر بزرگسالان راه رفتن در نوزادان قاب از کلنی برداشت شده بودند قبل از قرار داده شدن در ظروف را برای زیست سنجی برای Varroa بازرسی می شود.

زیست سنجی Bioassay

با استفاده از روش در معرض قرار گرفتن کامل (Ruffinengo و همکاران، 2005) سمیت اسانس درV.destructor و A.mellifera مورد بررسی قرار گرفت. دوز در microlitres اعمال شده در هر قفس محاسبه شد که برای میکرولیتر 2.5، 5، 10 و 20 از هر اسانس در 2 میلی لیتر اتانول º 96 به رقیق شد. این محلول درمان به پایین از ظروف پتری (150 × 20 میلی متر) استفاده شد. پس از حلال تبخیر شد، پنج کنه زن بالغ و بالغ زنبور کارگر در هر ظرف پتری قرار داده شد و دریافت برنامه های در معرض قرار گرفتن کامل. دستگاه را با آب نبات و آب در داخل ظروف زیستسنجی Bioassay به عنوان مواد غذایی برای زنبورها قرار داده شده است. کنه و زنبورها در ظروف پتری با هر روغن و با coumaphos فنی درجه (Pestanal ®، سیگما آلدریچ) به عنوان کنترل مثبت و منفی بودند. پنج تکرار برای هر واحد آزمایشی ساخته می شدند. ظروف زیستسنجیBioassay در اجاق گاز انکوباسیون در 29 ± 0.5 ° C و 70٪ RH قرار داده شده است. مرگ و میر زنبورها و کنه در هر پتری دیش در 24، 48 و 72 ساعت انجام شد. مرگ و میر به آرامی prodding هر کنه با قلم مو باریک مورد بررسی قرار گرفت، فقدان پاسخ به محرک های متوالی در طول 1 دقیقه نشانه ای از مرگ در نظر گرفته شد. همه زنبورها بصری وجود کنه بازرسی شده شده است.

تجزیه و تحلیل آماری

تجزیه و تحلیل آماری با استفاده از نرم افزار خاصی برای محاسبه مقادیر LC50 (غلظت کشنده که جان 50 درصد از حیوانات در معرض قرار گرفتن) انجام شد، و 95 درصد ضریب اطمینان معکوس محدودیت توسط USEPA(1986) نرم افزار EPA (نسخه 1.5) با توجه به لیندبرگ و همکاران است. (2000). اصلاح ابوت (ابوت 1925) و روش جایگزین Litchfield و Wilcoxon (1949) در تجزیه و تحلیل قرار گرفتند. مقایسه چندگانه در میان همه مقادیر LC50 به دست آمده با استفاده از LC50/lower نسبت بیشتر LC50 مستقر در ارزش آماری توصیه می شود در روش استاندارد (APHA 1992) انجام شد. نسبت گزینش، به عنوان A. mellifera LC50 / V.destructor LC50 محاسبه شده برای هر یک از درمان در هر زمان مشاهده، تخمین زده شد. نسبت به شاخص های انتخابی تنها در صورتی معنی دار از 95٪ ضریب اطمینان از مقادیر LC50s در حال مقایسه بود با هم همپوشانی دارند در نظر گرفته شد.

نمایش نتایج

ترکیبات اصلی (1٪) از اسانس استخراج شده از گونه های گیاهی مختلف مورد مطالعه قرار گرفته در جدول 1 داده شده است. اسانس اسطوخودوس، lavendin و لورل لینالول به عنوان جزء اصلی در ترکیب خود را نشان داد. 1،8-Cineole بود نیز به عنوان یک عنصر غالب در روغن ضروری لورل وجود دارد. با این حال، روغن آویشن با غلظت بالایی از تیمول مشخص شد. بازده اسانس استخراج شده 1-1.3٪ 0.2-0.25٪، 2.5-5٪ و 1.5-2.5٪ (w / v) برای آویشن، برگ بو، اسطوخودوس و lavendin، به ترتیب بودند. در جدول 2 خواص فیزیکی از تراکم و شاخص انکسار در 20 ° C برای هر یک از اسانس ارائه شده است. روغن آویشن ضروری نشان داد که بالاترین ارزش برای هر دو خواص. طیف UV برای هر یک از اسانس در شکل 1نمایش داده می شود.. اسانس آویشن جذب قوی در طول موج 275 نانومتر نشان دهنده حضور گروه chromophore کونژوگه با حلقه معطر در 12.5 پی پی ام می باشد. با این حال، روغن های ضروری دیگر به اوج خود جذب اندکی با وجود بودن در غلظت های بالاتر (200 پی پی ام) ارائه شده است. طیف سنجی مادون قرمز باند مشخصه برای هر یک از اسانس (شکل 2) نمایش داده می شود. روغن آویشن، باندهای مربوط به: methylic C-H اوراق قرضه بین 3،000 و 3100 CM-1، OH فنولیک بین سالهای 3610 و 3640 CM-1، C = C و CH حلقه معطر بین 1،500 و 1600 CM-1 و، بین 3000 3100 CM-1 بود. : برای نفت لورل: methylic C-H اوراق قرضه بین 3،000 و 3100 CM-1، CO اتر بین 1080 و 1300 CM-1. CH alquenes بین 3020 CM-1 و 3080 CM-1، OH بین 3200 و 3600CM-1 و CO alkane اوراق قرضه CH بین 2850 و 2960 CM-1: از همان الگوی باند برای هر دو، روغن اسطوخودوس و lavendin ضروری یافت شد 1080 و 1300 CM-1.

حدود LC50 مقادیر به دست آمده در هر زمان مشاهده و نسبت های انتخابی برای هر درمان در جدول 3 نشان داده شده است. کنه، LC50 ارزش برگ بو، اسطوخودوس و اسانس lavendin تنوع آماری معنی دار در طول سه بار مشاهده نشان می دهد نیست. با این حال، LC50 ارزش روغن آویشن را در 48 و 72 ساعت از نظر آماری کمتر از 24 ساعت بود. هنگامی که LC50 ارزش های فردی برای هر یک از اسانس را با یکدیگر مقایسه شد، تنهاLC50 ارزش لورل و آویشن متفاوت بود. مرگ و میر زنبور آشکار تنها در درمان با روغن آویشن بود، رسیدن به یک مقدار LC50 8.05 میلی لیتر / ظرف پتری بعد از 72 ساعت قرار گرفتن در معرض. در 24 ساعت بعد از درمان، روغن ضروری آویشن نشان داد که بالاترین نسبت انتخابی اما در 48 و 72 ساعت اسطوخودوس اسانس، ارائه شاخص انتخابی بهتر. مقدار LC50 برای coumaphos .57 (.25-.79) میکروگرم / پتری دیش در 24 ساعت بود، و نسبت به انتخاب بالاترین دادگاه بود.

بحث

برخی از روغن های گیاهی ضروری و یا اجزای تشکیل دهنده خود را به طیف گسترده ای از فعالیت بر علیه باکتری های بیماری زا و قارچ ها (Kotan و همکاران 2008)، آنها را به اثر در کنترل حشرات ناقل (Chaiyasit و همکاران 2006)، هجوم کنه (Coskun و همکاران، 2008) نشان دادیا کنه ناقل پاتوژن (Iori و همکاران، 2005)، در مورد شپش سر انسان و غبار خانه (ویلیامسون و همکاران 2007)، در میان دیگران است. به تازگی، محققان فعالیت بیولوژیک خود را در برابر آسیب های زنبور عسل به اثبات رساند. برخی از روغن های ضروری، پتانسیل قابل توجهی برای کنترل Foulbrood آمریکا، بیماری های ناشی از لاروها sporulated Paenibacillus باکتری (Gende و همکاران، 2009)، بیماری chalkbrood از رابط های برنامه کاربردیAscosphaera (Dellacasa و همکاران، 2003) و کنه های انگل، Acarapis woodi و V مخرب (کالدرون و همکاران، 1997). ترکیب روغن های ضروری آزمایش در این کار با GC و GC / MS به دست آمد، و آن را مطابق با کسانی که در که توسط آلونسو (1998) گزارش شده بود. لینالول جزء خاص عمدتا غالب برایL.officinalis و روغن L.hybrida ضروری بود، این بخش نیز در حال حاضر در روغن L.nobilis ضروری است اما آن را با غلظت بالاتر از 1،8-cineole مشخص شد. با این حال، فراوان ترین ترکیب برای T.vulgarisروغن تیمول بود. مقدار تراکم و شاخص انکسار برای آخرین نفت بالاترین بودند از این واقعیت این است که نشانه ای از حضور ترکیب با بنزن هسته (Montes 1981).

در ارتباط با اسپکتروسکوپی UV، اسانس نشان داد که واکنش متغیر با توجه به ترکیب آن است. به طور کلی، این روش محدود به بررسی روغن های های بنزن ضروری با گروه کرومسفر است. فنولی روغن های ضروری مانند آویشن، مشاهده قله مربوط به فنل است. از سوی دیگر، روغن با گروه الکل مانند لینالول و 1،8-cineole شده اند کمتر فعال در UV. برای اسانس با ترکیبات ترپن دار، تجزیه و تحلیل IR اجازه می دهد تا به شناسایی حضور هیدروکسیل و گروههای کربونیل، C = C اوراق قرضه، دو در میان دیگران، در حالی که این روغن با ترکیبات بنزن، طیف مادون قرمز نشان داد علائم مشخصه این ترکیبات و ارائه اطلاعات در مورد عملکرد گروه در مولکول است. خواص فیزیکی تعیین شده برای اسانس با ترکیب شیمیایی شدند، برای آن، آنها را می توان به عنوان روش از خلوص، شناسایی و تایید استفاده می شود.

عوامل متعددی می توانند بر روی عملکرد و ترکیب شیمیایی روغن های ضروری (ساندا و همکاران، 2001) تحت تاثیر قرار دهد. گونه های گیاهی، اندام های گیاهی، خاستگاه جغرافیایی آن، زمان برداشت آن و استخراج های خاص استفاده می شود برای تولید اسانس را باید برای تجزیه و تحلیل نتایج در نظر گرفته شده است. عدم ثبات در ترکیب شیمیایی اسانس بدون شک به تنوع در نتایج به دست آمده توسط محققان مختلف کمک می کند. به دست آوردن نتایج قابل مقایسه، مهم است که برای تعیین روش استخراج استفاده می شود و مشخص خواص فیزیکوشیمیایی روغن های مورد استفاده در زیست سنجی (Imdorf و همکاران 1999). در این تحقیق، روغن های ضروری از نظر جسمانی و از نظر شیمیایی مشخص و پس از آن، آن را ممکن است برای به دست آوردن نتایج comparatives.

کنه و زنبورها در طول درمان با چهار نوع اسانس به موضعی، بخار، و به طور بالقوه دهان و دندان برنامه های کاربردی قرار می گیرند. در این سیستم مورد استفاده قرار گرفت، زیرا آن را قادر می سازد برای آزمایش زنبورها و مسمومیت کنه به طور همزمان، و به ما اجازه بررسی اثر دوز، مدت زمان قرار گرفتن در معرض، و نحوه کاربرد. در پژوهش حاضر، افزایش در زمان قرار گرفتن در معرض منجر به افزایش سمیت از چهار اسانس برابر کنه Varroa. نتایج مشابهی توسط ال Zemity همکاران ثبت نام کرده بودند. (2006) با استفاده از روغنهای دیگر است. در 24 ساعت بعد از درمان، T.vulgaris اسانس می کشد که 50٪ از کنه در کمترین دوز بود، با این حال، در 48 و 72 ساعت پس از قرار گرفتن در معرض، LC50 بهترین ارزش ها و نسبت گزینش برای نفت L.officinalis کنه. تمامی روغن های ضروری مرگ و میر کنه بدون اثرات مضر بر روی زنبوران بالغ ایجاد می شود.

اثرات مرگبار و کشندگی اسانس و اجزای آنها بر روی زنبور عسل توسط محققان مختلف گزارش شده اند. تیمول است که در ادبیات به عنوان جزء اسانس به طور گسترده ای در پرورش زنبور عسل استفاده می شود چرا که آن را نمایشگاه فعالیت های بالا miticidal است که به خوبی توسط زنبورها (Imdorf و همکاران 1999) تحمل اگرچه جانشین ملکه در شرایط مزرعه گزارش شده است (Sammataro و همکاران. 1998). با این حال، در این کار، آن را با روغن ضروری آویشن، متشکل از 65.3 درصد از تیمول مورد آزمایش قرار گرفت، و آن را نشان داد شاخص های انتخابی کم به دلیل مسمومیت خفیف آن بر زنبورها. لینالول حال حاضر جزء در بخش بزرگ درL.nobilis، L.officinalis و روغن L.hybrida ضروری بود. محققان دریافته اند که این ترکیب نشان داد که تنوع مستعمره به مستعمره زمانی که آن را در مزرعه (کالدرون و اسپیواک 1995) اندازهگیری شد و علاوه بر این، مرگ و میر نوزادان و کاهش در تولید مثل کنه در ارزیابی های آزمایشگاهی شده اند (Imdorf و همکاران. 1999). در ادبیات، با استفاده از روش با استفاده از روغن اسطو خودوس عادی ضروری مرگ و میر کنه خوب را نشان داد (اردشیر و همکاران، 2002.) علاوه بر این، موثر در تولید مثل کنه، اما دیده شده است که غلظت بالاتر آشفته رفتار زنبور عسل (Imdorf و همکاران 1999). همچنین اسانس اسطوخودوس، برگ بو و آویشن داشتن دافع عمل کنه Varroa (Imdorf و همکاران 1999) پیدا شد. کالین و همکاران. (1999) این فرضیه را که دورکنندگی در دراز مدت ممکن است به باروری کنه زنان را کاهش می دهد. غلظت بسیار پایین مونوترپن ها و یا ترکیبات فنلی می تواند کاهش باروری این کرم، القاء در نتیجه جلوگیری از سطوح بالایی از انگلی در کلنی های زنبور عسل است. Laurus nobilis نفت ضروری در ترکیب 1،8 - cineole به عنوان جزء عمده، Imdorf و همکاران. (2006) و Ruffinengo و همکاران. (2007) نشان داد که 1،8-cineole باعث مرگ و میر کنه بالا. در تحقیقات خود، لی و همکاران. (2008) به این نتیجه رسیدند که فعالیت روغن های مختلف ضروری است با ساختار مولکولی همراه بود، نشان می دهد که انواع گروه های عملکردی به جای پارامترهای فشار آب گریزی یا بخار به نظر می رسد به ایفای نقش در تعیین سمیت در برابر حشرات.

کالدرون و اسپیواک (1995) به این نتیجه رسیدند که عوامل متعددی منجر به اثربخشی کلی از هر گونه مواد کنه کش. غلظت ترکیبات درگیر، طول درمان، روش زایمان، محیط زیست مستعمره (یا نه نوزادان وجود داشته باشد)، محیط زیست زنبورستان و دمای محیط می تواند اثربخشی درمان را تحت تاثیر قرار دهد. این کنترل از جمعیتV.destructor در مستعمرات زنبور عسل نیاز است که درمان نشان می دهد یک فعالیت قابل قبولacaricidal بدون عارضه جانبی زنبور عسل، و ترک باقی مانده ندارد و یا حداقل در عسل و موم با حاشیه ایمنی به مشتری می باشد. Adamczyk و همکاران. (2005) به این نتیجه رسیدند که حضور باقی مانده های اجزای اسانس در نمونه های عسل یک خطر بهداشتی و یا یک خطر برای سلامت انسان باشد نیست، فقط ممکن است طعم عسل را تغییر دهید. فقدان گیرنده های octopamine در مهره داران حساب به احتمال زیاد برای انتخاب پستانداران عمیق از اسانس به عنوان حشره کش یا acaricides (Isman 2000). این کار با تمرکز بر خصوصیات روابط پاسخ دوز در میان روغن های ضروری و اثرات مرگ و میر کنه و زنبورها در همان زمان بود. این اثرات شده اند مرتبط با ترکیب اسانس شدند. بنابراین، نتایج به دست آمده تکرارپذیری و قابل پیش بینی است. ما در حال حاضر در یک سیستم کار برای آزاد سازی آهسته در طی یک دوره طولانی تر در داخل کلنی های زنبور عسل برای ارائه یک اقدام کنترل برای درمان کلی V.destructor.

جدول شماره 1 ترکیبات اصلی (1٪) تست شده از اسانس ها علیه V.destructor و A.mellifera

اسانس توسط

تاثیر اسانس های کنه کش و حشره کش در Varroa destructor (Acari: Varroidae) و Apis mellifera (Hymenopt

مطالب مشابه :

ویلا ساوا

علائم و مفاهیم تحلیل سایت

تجزیه و تحلیل سبک دیکانستراکشن

انجام پروژه های معماری در کرج و تهران

پروژه اماده تحلیل ویلای درویش اباد 1389 و معماری پویا خزائلی پارسا

تاثیر اسانس های کنه کش و حشره کش در Varroa destructor (Acari: Varroidae) و Apis mellifera (Hymenopt

ویلا میریا