نمونه های سیتولوژی - رنگ امیزی هماتوکسین-ائوزین و پاپانیکولا

مقدمه

نمونه های سیتولوژی معمولا بوسیله سرنگ یا لوله آزمایش به بخش پاتولوژی منتقل می شوند. برای تهیه لام از نمونه های سیتولوژی ابتدا آنها را سانتریفیوژ کرده و سپس از رسوب آنها یک قطره برداشته و بر روی لام قرار می دهیم بعد آنها را با یک فیکساتور مناسب فیکس می کنیم.

در مواردی که نمونه سیتولوژی رقیق بوده و دارای تعداد سلول کمی می باشد بعد از سانتریفیوژ یک قطره از رسوب را در وسط لام گذاشته وسپس توسط الکل 96%آن را فیکس می کنیم.
در مواردی که نمونه سیتولوژی بسیار غلیظ باشد می توانیم بدون اینکه آن را سانتریفیوژ کنیم از آن یک قطره برداشته و روی لام بریزیم سپس صبر می کنیم تا خشک شود بعد آن را به وسیله الکل 96% فیکس می کنیم.

رنگ امیزی در آزمایشگاه بافت شناسی

در آزمایشگاه پاتولوژی برای رنگ آمیری نمونه های بافتی از دو نوع رنگ آمیزی عمومی و اختصاصی استفاده می کنند.مهمترین و بیشترین رنگ آمیزی که در آزمایشگاه به عنوان رنگ آمیزی عمومی استفاده می شود رنگ آمیزی هماتوکسین-ائوزین(H&E) می باشد.اما رنگ آمیزی اختصاصی دارای تنوع زیادی بوده و مختص بافت خاصی می باشد. چند مورد از مهمترین رنگ آمیزی های اختصاصی عبارتند از:

رنگ آمیزی PAS : جهت برسی بافت گلیکوژن
رنگ آمیزی تری کلروم: جهت برسی بافت کلاژن
رنگ آمیزی رتیکولین : جهت برسی ساختار بافت
رنگ آمیزی ذیل نلسون: جهت برسی مایکو باکتریوم
رنگ آمیزی آهن: جهت برسی آهن
رنگ آمیزی کریستال ویوله: جهت برسی هلیکو باکتر

رنگ آمیزی مخصوص نمونه های سیتو لوژی یا مایعات رنگ آمیزی پاپانیکولا می باشد.

رنگ آمیزی هماتوکسین ائوزین - hematoxylin and eosin stain

این رنگ آمیزی به عنوان رنگ آمیزی عمومی در اکثر آزمایشگاه های پاتولوژی مورد استفاده قرار می گیرد . مراحل این رنگ آمیزی به شرح زیر می باشد :

مرحله شفاف سازی

در این مرحله لام های تهیه شده را در 3 ظرف گزیلول قرار می دهیم تا پارافین زدایی شوند. لام ها را در هر کدام از ظرف های گزیلول به مدت 20 دقیقه قرار می دهیم تا فرایند شفاف سازی به خوبی انجام شود.

مرحله آبدهی

این مرحله با کمک الکل انجام می شود بدین ترتیب که 2 ظرف حاوی الکل مطلق و 2 ظرف حاوی الکل 96 درجه تهیه شده و لام ها را به ترتیب در ظروف مربوط به الکل بادرجه بالا و درجه پایین قرار می دهیم. بهتر است نمونه های لام را در هرکدام از ظروف به تعداد 10 بار وارد و خارج کنیم.

مرحله رنگ آمیزی

در این مرحله ابتدا نمونه های لام را با آب شستشو داده و سپس آنها را به مدت 5 دقیقه در رنگ هماتوکسین که رنگ مخصوص هسته است قرار می دهیم و دوباره با آب شستشو می دهیم. بعد لام ها را یک بار در محلول اسید الکل وارد می کنیم تا رنگ هماتوکسین موجود در سیتوپلاسم از بین برود سپس با آب شستشو می دهیم. در مرحله بعد لام ها را به تعداد 3 بار در کربنات لیتیم که باعث فیکس کردن رنگ هسته می شود وارد و خارج می کنیم و دوباره با آب شستشو می دهیم.در مرحله آخر نیز لام ها را به مدت 3 دقیقه در رنگ ائوزین که رنگ مخصوص سیتوپلاسم است قرار می دهیم.

مرحله آبگیری

این مرحله کاملا مشابه مر حله آبدهی است با این تفاوت که در مرحله آبگیری لام ها را ابتدا در الکل با درجه پایین سپس در الکل با درجه بالا قرار می دهیم. همچنین در این مرحله علاوه بر الکل لام ها را در 3 ظرف گزیلول نیز قرار می دهیم .

رنگ آمیزی پاپانیکولا (Papanicolaou's stain)

این رنگ آمیزی مختص نمونه های سیتولوژی و مایعات می باشد. رنگ آمیزی پاپانیکولا شامل مراحل زیر می باشد:

مرحله فیکساسیون

ابتدا لام های مربوط به نمونه های سیتولوژی را در 3 ظرف گزیلول (هر کدام به مدت 20 دقیقه) قرار می دهیم سپس آنها رادر الکل 96 درجه حداقل به مدت 30 دقیقه قرار داده تا کاملا فیکس شوند. سپس نمونه ها را به ترتیب 10 بار به الکل 80 درجه و 10 بار به الکل 70 درجه وارد و خارج کرده و بعد با آب شستشو می دهیم.

مرحله رنگ آمیزی هسته

در این مرحله ابتدا نمونه ها را به مدت 5 دقیقه در رنگ هماتوکسین که رنگ مخصوص هسته است قرار می دهیم سپس لام ها را با آب قلیایی یا آب شهری بدون کلر(چون کلر رنگ هماتوکسین را از بین می برد) شستشو می دهیم. در مرحله بعد لام ها را یک بار وارد محلول اسید الکل می کنیم تا رنگ هماتوکسین سیتوپلاسم از بین برود سپس آنها را دوباره شستشو می دهیم. بعد لام ها را 3 بار وارد محلول کربنات لیتیم می کنیم تا رنگ هسته فیکس شود سپس با آب لام ها را شستشو می دهیم.

مرحله رنگ آمیزی سیتوپلاسم

برای رنگ آمیزی سیتوپلاسم ابتدا لام ها را به تعداد 10 بار وارد الکل 96 درجه می کنیم. بعد به مدت 4 دقیقه نمونه ها را در محلول رنگی Orange(Og6) قرار می دهیم. سپس نمونه ها را 2 بار در الکل 96 درجه وارد کرده و بعد به مدت 5 دقیقه در رنگ EA50 قرار می دهیم.

مرحله آبگیری

در این مرحله نمونه ها را با کمک الکل آبگیری می کنیم بدین ترتیب که 2 ظرف حاوی الکل 96 درجه و دو ظرف حاوی الکل مطلق و 3 ظرف حاوی گزیلول تهیه کرده و لام ها را به ترتیب وارد ظروف حاوی الکل با درجه پایین ، الکل بادرجه بالا و گزیلول می کنیم .

پس از رنگ آمیزی لام ها بر روی آنها چسبی به نام Canad Bond می ریزیم. سپس بوسیله لام مقداری گزیلول برداشته و لامل را بر روی ان قرار می دهیم. در هنگام گذاشتن لامل باید دقت کنیم که حبابی ایجاد نشود.

نمونه های سیتولوژی - رنگ امیزی هماتوکسین-ائوزین و پاپانیکولا

مطالب مشابه :

پاتولوژي چيست؟

آسیب شناسی (پاتولوژی )چیست؟

پزشکی چیست ؟

پاتولوژی و پاتوفیزیولوژی ام اس

آزمایش های غربالگری دوران بارداری چیست و چه ضرورتی دارد؟(قسمت اول)

نمونه های سیتولوژی - رنگ امیزی هماتوکسین-ائوزین و پاپانیکولا

رشته زیست شناسی (بیولوژی) ، گرایش ها و بازار کار

توده ها و کیست های تخمدان

پاتولوژی مفاصل زایگوپوفیریال ( فاست ) :

ندول‌هاي تيروييد