ساختار دیواره اولیه سلول طی تکامل گیاهان خشکی زی

چکیده

بررسی دیواره های اولیه سلولی گیاهان پست، درک ما را از بیولوژی این ارگانیسم ها بهتر می کند، اما همچنین می تواند درک ما را از ساختار دیواره سلولی و نقش آن در نهاندانگان که از گیاهان پست نمو یافته اند را بهتر کند. (بهبود بخشد)

دیواره های سلولی 8 گونه از خزه تا نهاندانگان تهیه شده و عصاره های شیمیایی آن ها به ترتیب برای تجزیه بخش های پلی ساکاریدی اصلی به کار برده شد.

ترکیبات گلیکوزیل این بخش ها با گاز کروماتوگرافی تعیین شد. نتایج به دست آمده بین 8 گیاه مورد آزمایش مقایسه شد و برای تعیین مشخصات ساختاری که یکی خیلی خوب حفظ شده یا طی تکامل آشکارا تغییر کرده است، مقایسه بین نتایج و داده هایی از مطالعات گزارش شده مرتبط منتشر شده موجود انجام شد.

در بین صفات بسیار حفظ شده یک اسکلت سلولزی، کراتین همی سلولزهایی مثل گزیلوگلوکان و در حیطه پلی ساکاریدهای پکتیکی را منوگالاکتورونان II وجود داشت. در میان ویژگی های تغییر یافته مانوزیل فراوان بود شامل همی سلولزها و قندهای متیله شده.

مقدمه

دانش مربوط به ساختار دیواره های سلولی گیاهی نهاندانگان به طور قابل ملاحظه ای از حدود 1970 افزایش یافت. برای مطالعات کنونی دیواره های سلولی اغلب از موتاسیون در گیاه آرابیدوسپسیس استفاده می شود.

مطالعه این موتاسیون ها اطلاعات جدید، مهم و قابل انعطاف هستند خصوصا در بخشی از بیوسنتز دیواره سلولی. و زمانی که با ژنتیک ملکولی ترکیب شد با تکمیل توالی های ژنوم آرابیدوپسیس دستیابی به این اطلاعات بیشتر شد. گرچه بیشتر پژوهش های کنونی روی دیواره های سلولی، روی آرابیدوپسیس و دیگر نهاندانگان متمرکز است، اخیرا گزارش هایی از تمرکز روی دیواره های سلولی گیاهان پست شامل جلبک ها، گیاهان بدون دانه و بدون آوند هم ارائه شده است.

با اینکه این مطالعات اضافه شدند به دانش ما درباره گیاهان پست، احتمال دارد که دانش ما از دیواره های سلولی نهاندانگان با بهبود دانش ما از دیواره های سلولی موجودات ساده تر از جایی که نهاندانگان آشکار شدند، افزایش یابد.

بیشتر زیست شناسان تکاملی پتریدوفیت ها را به عنوان نزدیک ترین موجودات زنده مرتبط با گیاهان دانه دار بررسی می کنند.

مرحله ی اساسی تر در تکامل از لیکوفیت ها و پتریدیوفیت ها با جگرواشها، شاخ واش ها و خزه ها نشان داده می شود گرچه همان محققین جگرواش ها را به عنوان ابتدایی ترین گیاهان خشکی زی بررسی می کنند. روابط بین جگرواش ها، شاخ واش ها و خزه ها بحث های زیادی باقی می گذارد. به علاوه، ارتباط بین این گیاهان ابتدایی و گیاهان آوندی نامشخص باقی مانده است. توجه در مطالعه گیاهان پست برای سهولت فهم ما از نهاندانگان با پیشرفت physcomi trella patens به عنوان یک سیستم الگو، افزایش یافت.

کشف موثر ژن هدف از بین هومولوگ های نوترکیب در این خزه و کاربرد این تکنیک برای فهمیدن عملکرد گیاه پیشرفت مهمی بود که پایه های بسیاری از مطالعات کنونی را با کاربرد این مدل تشکیل داد.

تحقیق حاضر ترکیبات گلیکوزیل دیواره های سلولی یک واریته از گیاهان پست خشکی و بازدانه را به دقت بررسی می کند. برای همه نمونه ها روی اعمال فرایندهای تخلیص و عصاره گیری دیواره های سلولی مشابه تاکید شد.

به این دلیل این شیوه یکنواخت مقایسه ساختارهای دیواره سلولی را در سرتاسر فیلوم (شاخه) آسان می کرد، یک حد بیشتر از حد امکان از گزارشات منتشر شده موجود، و بنابراین مجموعه داده های مفیدی برای بهبود فهم ما از تکامل دیواره های سلولی نهاندانگان تامین می کند.

عموما نمونه ها از برگ های سبز یا بافت های برگی گرفته می شدند. با برداشتن محور یا رگبرگ مرکزی، به جز برای گیاهانی که فقط اناسیون دارند یا دارای برگ های بسیار کوچک نزدیک به هم در ساقه هستند. در هر حال بافت های جوان ساقه در نمونه ها بودند.

در مورد خصوصیات دیواره های سلولی، بافت برگی به صورت پارانشیمی با دیواره های سلولی اولیه اما با مقداری از دیواره سلولی ثانویه و وجود لیگنین در نتیجه ی تراکئیدها و فیبرها در نظر گرفته می شود.

این فراوانی (و نه خالصی) دیواره سلولی اولیه در نمونه قابل توجه است. زیرا میزان داده ها در مورد دیواره های سلولی بازدانگان در گزارشات منتشر شده از مطالعات چوب به دست می آیند که این دیواره سلولی ثانویه اصلی است.

نتایج

ترکیبات گلیکوزیل ایمیدازول محلول، NaoH محلول و قطعات NaoH نامحلول در شکل های 1 و 2 و 3 به ترتیب برای 8 گیاه آزمایش شده در این مبحث، ارائه شده اند.

برای بیشتر 8 گیاه آزمایش شده، قطعات ایمیدازول محلول غنی از گالاکتورونوزیل، آرابینوزیل، گالاکتوزیل و بقایای رامنوزیل بود.

این قندها اجزای اختصاصی پلی ساکاریدهای پکتیکی نهاندانگان هستند که معمولا با ایمیدازول قابل استخراج هستند.

به هر حال بعضی اختلافات قابل توجه در میان 8 گیاه بدیهی بودند.

قطعه ای از Physcomitrella patens شامل بیش از 20 مول درصد گلوکز است که احتمالا به علت وجود نشاسته است زیرا همان مقدار نشاسته را در قطعات دیواره سلولی خزه پیدا کردیم حتی بعد از تکرار عصاره گیری با دی متیل سولفواکسید.

حذف 1% گلوکز از میانه محیط کشت می تواند یک استراتژی برای کاهش ناخالصی نشاسته باشد، اما اضافه کردن گلوکز مطلوب است زیرا رشد خزه را به طور قابل ملاحظه ای سرعت می بخشد. همچنین در این زمینه باید مورد توجه قرار گیرد که تا وقتی که رشد خزه تحت شرایط ضد عفونی در آزمایشگاه باشد مطمئنا نتایج آزمایشات قطعات دیواره سلولی رها از بیماری نسبت به ارگانیسم های دیگر هستند. این احتمال باقی می ماند که خزه هایی که در شرایط طبیعی رشد می کنند دارای ویژگی های متفاوتی در دیواره ی سلولی می باشند.

اختلافات دیگر از انواع پلی ساکاریدهای پکتیکی نهاندانگان در قطعات محلول ایمیدازول از پسیلوتوم نودوم و اکویسیتوم هیمال آشکال است.

هر دو مخصوصا غنی بودند در بقایای گالاکتورونیل اما با آرابینوزیل نسبتا کم، گالاکتوزیل و بقایای رامنوزیل در مقایسه، قطعات پسیلوتوم نودوم و اکویسیتوم هیمال به ترتیب، نسبتا غنی بودند در مانوزیل و بقایای گلوکورونوزیل.

یکنواختی قابل توجهی در قطعات ایمیدازول محلول از Osmuna regalis، سلاژنیلا لپیدوفیلا، انسفالارتوس لونگی فولیس، متاسکویا گلی پتواستر و بودئیدس و Gnetum gnemon معلوم بود. گلوکوزیل باقی مانده موجود در بعضی از این بخش ها می تواند دوباره حاکی از بقایای نشاسته ناخالص باشد.

در بین قندهای اصلی، بقایای گلیکوزیل خصوصا قابل توجه بودند در سلاژنیلا لپیدوفیلا physcomitrella patens، پسیلوتوم نودم، Osmunda regalis و Gnetum gnemon.

به طور غیر معمول بقایای 3-5-متیل رامنوزیل در بخش های ایمیدازول محلول پیدا شده از physcomitrella , encephalartos longifolivs, Gnetum gnemon, Osmunda و اکوئیستوم هیمال.

قطعه ای از متاسکویا گلی پتواستروبوئیدس شامل مقدار کمی از بقایای 4-5-متیل گلوکورونوزیل است.

در خصوص نهاندانگان، پیش بینی می شود بخش های NaoH محلول می باید دارای همی سلولز غالب باشند که شامل هم گزیلوگلوکان و گلیکوکورونوآرابینواکسیلان ها می باشد.

گزیلوکورونوآرابینوگزیلان ها بسیار فراوان هستند در تک لپه ای های کاملئیوئید شامل گراس ها (گندمیان)، غلات، نخل ها، Bromeliads، زنجبیل، و سرو.

سومین همی سلولز، مخلوط (3-1)، (4-1) D-B- گلوکان در حبوبات و گندمیان راسته Poales یافت می شود. تا اندازه ای این قندها هم پیش بینی می شوند، گزیلوزیل، گلوکوزیل، آرابینوزیل، گلوکورونوزیل، 4 و 5- متیل گلوکورونوزیل، گالاکتوزیل و فوکوزیل (دو تای آخری دارای مقداری گزیلوگلوکان هستند.)

در قطعات NaoH از 8 گیاه آزمایش شده عموما بقایاتی قندهای اصلی وجود دارد (شکل 2)

به هر حال اختلاف زیادی در میان گروه وجود داشت. فراوانی بقایای مانوزیل در بخش هایی از پسیلوتوم نودوم و physcomitrella patens کم بود و در بخش هایی از بازدانگان پیشرفت کمتری داشت.

بقایای گالاکتورونوزیل فراوانی قابل پیش بینی زیادی در قطعات اکوئیستوم هیمال و Osmunda regalis نداشتند که نشان دهنده این است که در این گونه ها پلی ساکاریدهای پکتیکی تا اندازه ای باقی مانده عصاره گیری با ایمیدازول بودند و به این نحو با همی سلولزها در بخش های NaoH محلول ظاهر شدند.

اختلاف در توانایی تولید عصاره پکتیکی حتی در میان نهاندانگان هم ایجاد می شود هر چند به عقیده برخی پژوهشگران برای استخراج پلی ساکاریدهای پکتیکی قبل از همی سلولزها، ترتیبی از مراحل افزایش مواد مبدل انجام می شود.. بقایای 3-5- متیل رامنوزیل غیر عادی در بخش هایی NaoH محلول از physcomitrella patens. و Encepha، گنتوم، اسموندا و اکوستیوم مشخص شد. در نهاندانگان در قطعات NaoH محلول سلولز با بعضی گلیکوپروتئین های اکستنسین موجود اصلی هستند. بنابراین در استخراج ترکیبات گلیکوزیل، بیشترین حجم گلیکوزیل با کمترین مقدار آرابینوزیل و بقایای گالاکتوزیل وجود دارد.

در هر 8 گیاه مقدار گلیکوزیل در قطعات NaoH غیر محلول پایین تر از حد انتظار بود (شکل 3) گرچه بقایای مانوزیل دارای سطح نسبتا بالا در بخش هایی از physcomitrella، پسیلوتوم نودوم، اکویسیتوم هیمال و سلاژنیلا لیپدوفیلا بودند و در گیاهان دیگر مقدار کمتری از این قند وجود داشت.

بحث

این طرح مبحث تحلیل دیواره های سلولی گیاهان پست از بین عصاره های شیمیایی برای تجزیه دیواره ها به قطعات پلی ساکاریدی اصلی است.

برای کمیت پذیر کردن ترکیبات گلیکوزیل، این قطعات سپس با گاز کروماتوگرافی تعیین شد. نتایج به دست آمده بررسی های گسترده اخیر توسط پایروفرای را تکمیل کرد.

روش مبسوط گوارش آنزیمی همه ی دیواره ها و تحلیل های نیمه کمی مونوساکاریدها و الیگوساکاریدها با گاز کروماتوگرافی کاغذی و الکتروفورز کاغذی تعیین شد.

هر دوی این روش ها به چندین منظره قابل توجه طی تکامل دیواره های سلولی گیاهان ابتدایی اشاره می کند. در بین عموم ساختارهای گیاهان خشکی آزمایش شده در این مطالعه و مطالعات دیگر، سلولز به عنوان اسکلت دیواره اولیه به مقدار زیاد وجود دارد.

پاپروفرای قاطعانه ثابت کردند که در دیواره های سلولی اولیه همه گیاهان خشکی آزمایش شده گزیلوگلوکان وجود دارد اما در دیواره های سلولی جلبک های سبز کاروفسیه وجود ندارد، که این مطلب به دقت مربوط به گیاهان خشکی زی است.

بنابراین در مراحل تکامل گیاهان از آب به خشکی ظهور گزیلوگلوکان در دیواره مهم بود.

ترکیبات گلیکوزیل قطعات NaoH محلول در مطلب کنونی باید با حضور گزیلوگلوکان در گیاهان بررسی شده سازگار باشد اما فراوانی نسبی گزیلوزیل، گلوکوزیل، آرابینوزیل، گلوکورونوزیل و بقایای 4-5-متیل گلوکورونوزیل در سلاژنیلا، Encephalartos، متاسکویا و گنتوم اشاره می کند که گلوکورونوآرابینوگلوکان احتمالا با اهمیت ترین همی سلولز در این گونه هاست.

از جمله جالب ترین نتایج منسوب به تغییر تکاملی در دیواره های سلولی گیاهان خشکی، تایید سطوح بالایی از پلی مر های مانوز دار در دیواره های گیاهان پست نسبت به نهاندانگان است (پاپروفرای، شکل 3-1).

مانان و گالاکتومانان در دیواره های سلولی اندوسپرم بعضی دانه ها فراوان هستند.

در بافت های گیاهی گلوکومانان ها، گالاکتوگلوکومانان ها و گالاکتومانان ها به طور عادی در دیواره های سلولی نهاندانگان یافت شده اند اما اغلب با سطوح پایین.

گالاکتوگلوکومانان ها و گلوکومانان ها مانند همی سلولز های اصلی در دیواره های ثانویه که به بازدانگان نرم چوب مثل آبیس، ژنیکو، Larix، ، Thuja, picea (نوش) و توسکا شکل می دهند، کاملتر مطالعه شده اند.

هر کجا گالاکتوگلوکومانان ها تمایل به استخراج با NaoH دارند، گلوکومانان ها تمایل به باقی ماندن با سلولز دارند. هر دوی این پلی مرها رشته های خطی از مانوزیل و گلوکوزیل آزاد هستند. پیوند (4-1)b در هر دو مقدار متفاوت دارد اما معمولا مقادیر بیشتری مانوزیل آزاد دارند. گالاکتوزیل آزاد نیز در پیوندی (4-1)a با رشته مانوزیل یا گلوکوزیل آزاد وجود دارد.

نام گالاکتوگلوکامانان زمانی استفاده می شود که گالاکتوزیل آزاد کناری به طور عمده فراوان باشد. پاپروفرای متوجه شدند که مانوزیل آزاد در دیواره های سلولی اولیه کاریوفیت ها، بریوفیت ها، لیکوپودیوفیت ها، پسیلوتوم، اکوئیستوم و سرخس دانه دار بیشتر از سرخس های پیشرفته لپتوسپرانژیاتا، بازدانگان و نهاندانگان بود. مانوزیل فراوان اما گالاکتوزیل کمتر است.

در مطالعه حاضر گلوکوزیل آزاد یافت شده در قطعات NaoH غیر محلول در بخش هایی از physcomitrella پسیلوتوم نودوم، اکوسیتوم هیمال و سلاژنیلا لپیدوفیلا که شاید تعیین کننده حضور گلوکومانان ها باشد (شکل 3) Osmunda regalis، یک سرخس لپتواسپورانژیاتا، غلظت نسبتا کمی مانوزیل در هر یک از قطعات دیواره ی سلول دارد.

غلظت نسبتا بالای مانوزیل، همراه با گلوکوزیل و گالاکتوزیل آزاد، در قطعات NaoH محلول و حتی در قطعات ایمیدازول محلول از physcomitrella و پسیلوتوم نودوم ممکن است تعیین کننده حضور گالاکتوگلوکومانان باشد.

گالاکتوگلوکومانان ها قبلا پیدا شدند در دیواره ی سلولی خره آبزی Fontinalis antipyretica و سرخس پتریدیوم aquilinum.

پلی ساکاریدهای پکتیکی ترکیبات فراوان در دیواره های سلول بیشتر نهاندانگان هستند، گرچه در غلات و گندمیان نیستند، جائیکه غلظت پکتیک فقط درصد کمی دارد.

پاپروفرای کشف کردند که گالاکتورونوزیل آزاد، مشخصه ی ویژه پلی ساکاریدهای پکتیکی در همه گیاهان بررسی شده است.

سطح گالاکتورونوزیل آزاد گزارش شده در موارد هیدرولیز شده برلوفیت ها و کاریوفیت ها از هر یک از گیاهان آوندی بالاتر بود.

نتایج مطالعه حاضر (شکل 3-1) بقایای گالاکتورونوزیل را در دیواره های سلولی 8 گیاه موجود نشان می دهد اما فراوانی بالاتر را در بریوفیت physcomitrella از 7 گیاه آوندی دیگر حمایت نمی کند.

مطابق با گروه پلی ساکاریدهای پکتیکی حداقل 4 نوع قلمرو شناسایی شد:

1-هوموگالاکتورونان

2-رامنوگالاکتورونان I

3-رامنوگالاکتورونان II

4-گزیلوگالاکتورونان

رامنوگالاکتورونان I یک رشته از دی ساکاریدهای تکراری 2) a-D رامنوزیل- 1)(4-1)d-a گالاگتورونوزیل دارد با حدود نیمی از رامنوزیل آزاد، آرابینان طویل، گالاکتان یا آرابینو گالاکتان زنجیره های کناری در صورتی که سه تای دیگر یک رشته از (4-1)a گالاکتورونان دارند.

نتایج مطالعه حاضر با وجود این انواع متفاوت قلمروهای پکتیکی متناقض نیست و بعضی اختلافات خاص در میان گیاهان قابل توجه نیستند.

ترکیبات گلیکوزیل بخش های اکویستوم هیمال محتویات اساسی هموگالاکتورونان را تعیین می کند که در ایمیدازول محلول است (شکل 2) و رامنوگالاکتورونان I که در NaoH محلول (شکل 2) اما در ایمیدازول محلول نیست.

در مقایسه، ترکیبات بخش های محلول در ایمیدازول از پسیلوتوم نودوم ظاهرا حضور قابل توجه گزیلو وگالاکتورونان را تعیین می کند.

در میان جالب ترین نتایج درباره ساختار دیواره سلولی اولیه در سال های اخیر کشف شده است که رامنوگالاکتورونان II دارای یک اتصال عرضی بین پلی ساکاریدهای پکتیکی، از دی استربورات است. این اتصال عرضی معمای قدیمی راجع به نقش بورون به عنوان عنصر ریز مغذی مورد نیاز گیاه رفع کرده و نشان داده شده که این اتصال عرضی برای رشد طبیعی گیاه و نمو گیاه ضروری است.

رامنوگالاکتورونان II ساختاری بسیار پیچیده مرکب از حدود 25 قند آزاد از 12 نوع متفاوت دارد. این ساختار به طور فوق العاده در سرتاسر نهاندانگان، بازدانگان، لیکوفیت ها و پتریوفیت ها بیشترین حفظ را داشته است.

ماستونگا و همکاران اخیرا جزئیات را مطالعه کردند و پیدا کردند که رامنوگالاکتورونان II در نوعی از لیکوفیت ها و پتروفیت ها، شامل نسل های هم اسپوروفیت و هم گامتوفیت سرخس Cyrtomium falcatum است.

رامنوگالاکتورونان II به طور آشکار در بریوفیت ها قابل کشف بود، در گیاهان آوندی حضور کمتر از 1% داشت و در دیواره سلولی جلبک های سبز یافت نشد.

رامنوگالاکتوروتان II از پسیلوتوم نودوم، اکوسیتوم هیمال و 2 گروه لیکوفیت خزه ها و چهار سرخس جدا شد و تعدادی از ویژگی های ساختاری آن مشخص شد.

ساختار های پیدا شده بسیار شبیه رامنوگالاکتورونان II در نهاندانگان هستند گرچه در برخی از این گیاهان مثل پسیلوتوم نودوم یک یا دو رامنوزیل انتهایی آزاد با 3-5 متیل رامنوزیل آزاد غیر عادی جایگزین می شود.

پاپروفرای 3-5-متیل رامنوزیل آزاد را در دیواره های سلولی چندین کاریوفیت، بریوفیت و لیکوپودیوفیت پیدا کردند. گرچه یافته های پاپروفرای و ماستونگا احتمالا حاکی از توانایی سنتز پلی مرهایی شامل 3-5 متیل رامنوزیل آزاد که با تکامل گیاهان دانه دار از بین می رود نیست.

در مطالعه حاضر (شکل 1 و 2) 3 -5 متیل رامنوزیل آزاد در دیواره های سلولی physcomitrella، Encephala، گنتوم و اسموندا و اکوئیتوم هیمال پیدا شد اما در پسیلوتوم نودوم نبود.

مطالعات اولیه هم چنین 3-5-متیل رامنوزیل آزاد را در Osmunda Japonica , Encephala longifolius گزارش کردند.

بنابراین توانایی سنتز پلی مرهایی شامل 3-5 متیل رامنوزیل آزاد حفظ شده حداقل در گنتوفیتا، که عموما مانند پیشرفته ترین بازدانگان ملاحظه می شود.

به هر حال از physcomitrella ما پیدا می کنیم که 3-5 متیل رامنوزیل آزاد محاسبه می شود تقریبا 15% از گلیکوزیل باقی مانده در آرابینوگالاکتان.

مطالعه حاضر و مطالعات اولیه برخی جنبه های ساختار دیواره اولیه سلول را ظاهرا در سرتاسر گیاهان خشکی حفظ شده اند مشخص می کند و دیگر جنبه هایی را که آشکارا متکامل شده اند.

بعضی از این مشخصات مانند رامنوگالاکتوروتان II قویا توسط جزئیات ساختاری و داده های عملکردی حمایت می شوند.

دیگر ویژگی ها مانند سطوح بالاتر مانوز شامل اپی مرهایی در دیواره اولیه سلول های گیاهان پست در نهاندانگان، نیازمند مطالعات ساختاری و عملکردی بیشتری است.

همچنین اهمیت عملکردی قندهای متیله شده مثل 3-5 متیل رامنوزیل و 4-5 متیل گلوکوروزیل آزاد بحث شده در گزارش حاضر و 3-5 متیل گالاکتوزیل آزاد منحصر به لیکوفیت ها، هنوز خوب فهمیده نشده اند.

متیلاسیون DNA در تنظیم بیان ژن نقش عملکردی مهمی دارد. آیا متیلاسیون پلی ساکاریدها هم اهمیت عملکردی دارد؟

مواد و روش ها

مواد گیاهی

نمونه های پسیلوتوم نودوم (شاخه پتریدوفیتا، WISK سرخس)، اکوئیستوم هیمال (شاخه پتریدوفیتا، دم اسبیان)، اسموندا رگالیس (شاخه پتریدوفیا، سرخس)، Encephalartos longifolius (شاخه سیکادوفیتا، سیکاد)، متاسکویا گلی پتواستروبوئیدس (شاخه کونیفروفیتا، درخت ماموت ابتدایی) یک کونیفر برگ ریز (میوه مخروطی دارد مثل کاج) که این عقیده بود که این گیاه منقرض شده و دوباره پیدا شده است. (در سال 1940 در Szechuan چین) و Gentum gnemon (شاخه گنتوفیتا، درخت گنتوم) جمع آوری شدند از نمونه هایی در باغ های گیاهی در دانشگاه کالیفرنیا، Riversod.

سلاژنیلالیپدوفیلا (شاخه لیکوپودیوفیا، گیاه احیا شده) از ذخایر زیستی کارولینا به دست آمده بود. (شهر و قسمتی روی قسمت غربی رود می سی سی پی امریکا)

بیشتر این گیاهان سبز محور ساقه مانند دارند که رگبرگ مرکزی برای پسیلوتوم، اکوسیتوم و سلاژنیلا خارج شده است و دارای اناسیون یا برگ های بسیار کوچک نزدیک به هم در ساقه هستند. در نمونه ها بافت ساقه جوان ار رشد راسی شاخه ها وجود داشت.

Physcomitrella (فیلوم بریوفیتا، خزه) تحت شرایط استریل در آزمایشگاه رشد کرده بود محیط کشت متوسط شامل ماکرومغذی های با 1% گلوکز و 49 فلز بود. راس های رشد کرده از گامتوفیت سبز برگ دار جمع آوری شد.

تخلیص دیواره سلولی

گونه ها (5 گرم وزن تر) در نیتروژن مایع منجمد شدند سپس هموژنیزه شدند و با هاون و یک دسته ی هاون برای تهیه یک پودر خوب در نتیروژن مایع سائیده شدند.

پروتئین و مواد سیتوپلاسمی دیگر پودر با عصاره گیری 5/.2 ساعت از 35 میلی لیتر محلول A (200 میلی لیتر فنل 80% 80 میلی لیتر گلاسیال اسید استیک) خارج شدند و سپس سانتریفوژ شدند (10 دقیقه در 1200 گرم به دنبال آن عصاره گیری مجدد برای 2 ساعت با 35 میلی لیتر محلول B (175 میلی لیتر مثل 80%، 70 میلی لیتر گلاسیال اسید استیک، 35 میلی لیتر آب مقطر) انجام شد و سپس سانتریفوژ شدن فنل استیک اسید باقی مانده توسط شستشوی the pellete سه بار با 350 میلی لیتر اتانول 70% برداشته شد.

عصاره گیری از pellete با 35 میلی لیتر دی متیل سولفوکسید 90% بیش از 2 بار انجام شد و سپس باقی مانده های دی متیل سولفوکسید با شستن the pellete، 2 بار با 35 میلی لیتر اتانول 70% برداشته شد.

عصاره گیری از the pellete با 35 میلی لیتر کلروفورم، متانول برای 20 دقیقه با سانتریفوژ انجام شد و برای برداشتن باقی مانده های لیپیدهای 2 بار انجام شد. بعد از 2 بار شستشو (هر بار 35 میلی لیتر) با استون توسط سانتریفوژ the pellete در هوا خشک شد و سپس در خلاء خشک کننده بیرونی بیشتر خشک شد.

جزء به جزء کردن دیواره سلولی توسط عصاره گیری مداوم

دو قسمت (2/0 گرم) از اجزاء دیواره سلولی خشک 2 بار انجام شد برای 10 ساعت با 40 میلی لیتر ایمیدازول- Hcl، 5/0 مول بر لیتر، 7=pH برای استخراج پلی ساکاریدهای پکتیکی.

سوپرنانت ها از 2 بار عصاره گیری با سانتریفوژ جمع آوری شدند، ادغام شدند و تصفیه شدند با اسید استیک گلاسیال 6-5/5=pH، دیالیزند با آب مقطر و در خلاء منجمد شد.

آنالیز ترکیبات گلیکوزیل اجزاء دیواره سلولی

ترکیبات گلیکوزیل ایمیدازول محلول و NaoH محلول اجزاء دیواره سلولی مشخص شدند با متیل گلوکوزید تشکیل شده توسط متانولیز.

پیش بینی می شد که اجزاء NaoH غیر محلول غنی از سلولز باشد در حالی که توسط متابولیزه مشخص نشد و بنابراین با H2so4 پیش از متانولیز هیدرولیز انجام شد.

شناسایی تری متیل سیلیل متیل گلوکوسیدها اساس مقایسه حفظ زمان ها از استانداردهای قابل اعتماد و مسلم بود و اسپکترومتری گاز کروماتوگرافی- جرمی مورد نیاز بود.

ساختار دیواره اولیه سلول طی تکامل گیاهان خشکی زی

مطالب مشابه :

ساخت و تولید

شناخت مواد مختلف:

نقش فناوری نانو در بهبود کیفیت محصولات مختلف ساخته شده از چوب

ساختار دیواره اولیه سلول طی تکامل گیاهان خشکی زی

گزارش کار آزمایشگاه آلی 2

کاربرد DNA در اثبات جرائم

بسته بندی های هوشمند و کاربرد آنها برای گوشت